紫外可見分光光度計(jì)UV-VIS是一種基于物質(zhì)對紫外光或可見光區(qū)域的吸收特性，進(jìn)行定性、定量分析的儀器。它通過測量樣品對特定波長光的吸收程度，來確定樣品中物質(zhì)的濃度或結(jié)構(gòu)信息，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、生物、醫(yī)藥、環(huán)境等領(lǐng)域。其工作原理主要依賴于物質(zhì)對光的吸收特性。不同的物質(zhì)因其分子、原子和分子空間結(jié)構(gòu)的不同，其吸收光能量的情況也會有所差異。因此，每種物質(zhì)都有其有的、固定的吸收光譜曲線。通過測量物質(zhì)在特定波長下的吸光度，我們可以了解物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間的相互作用。
一、儀器準(zhǔn)備
開機(jī)預(yù)熱
接通電源，打開儀器開關(guān)，讓儀器預(yù)熱一段時間，一般需要15-30分鐘。這樣做是為了讓儀器內(nèi)部的光學(xué)元件、電子元件等達(dá)到穩(wěn)定的工作狀態(tài)，確保測量的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。例如，在一些高精度的測量中，未預(yù)熱充分的儀器可能會出現(xiàn)波長校準(zhǔn)偏差等問題。
波長校準(zhǔn)（如有需要）
使用已知光譜特性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如鈥濾光片）來檢查和校準(zhǔn)波長。不同型號的儀器可能有不同的校準(zhǔn)方法，但一般來說，需要將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)放入光路中，在儀器的軟件或控制面板上找到波長校準(zhǔn)選項(xiàng)，按照提示操作，使儀器顯示的波長與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的吸收峰波長相符。這一步驟對于保證測量波長的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，因?yàn)椴ㄩL的微小偏差可能會導(dǎo)致測量結(jié)果的較大誤差。
二、樣品準(zhǔn)備
選擇合適的吸收池
根據(jù)測量的波長范圍選擇玻璃或石英吸收池。一般來說，紫外光區(qū)（通常小于400nm）應(yīng)使用石英吸收池，因?yàn)槠胀úＡ兆贤夤?；可見光區(qū)可以使用玻璃吸收池。同時，要確保吸收池干凈、無劃痕，因?yàn)槲粘氐耐该鞫群途鶆蛐詴绊憸y量結(jié)果。
樣品溶液制備
將待測樣品溶解在合適的溶劑中，制備成適宜濃度的溶液。溶液濃度應(yīng)在儀器的線性范圍內(nèi)，即吸光度值在0.2-0.8之間比較合適。如果濃度過高，可能會導(dǎo)致吸光度超出線性范圍，使測量結(jié)果不準(zhǔn)確；濃度過低，則可能會使測量信號較弱，增加測量誤差。同時，要注意溶劑的選擇，溶劑在測量波長范圍內(nèi)應(yīng)該沒有明顯的吸收，否則會干擾樣品的測量。
三、測量操作
設(shè)置測量參數(shù)
根據(jù)樣品的性質(zhì)和測量要求，在儀器上設(shè)置測量模式（如吸光度模式、透過率模式等）、波長范圍、掃描速度等參數(shù)。例如，如果是進(jìn)行定量分析，通常采用吸光度模式；如果是研究樣品的光譜特性，可能需要設(shè)置較寬的波長范圍和適當(dāng)?shù)膾呙杷俣取?/div>
空白對照（參比）設(shè)置
選擇合適的空白溶液（如溶劑、不含待測物質(zhì)的溶液等），將其放入吸收池中，置于光路中作為參比。儀器會根據(jù)參比溶液的吸光度或透過率來校正樣品測量中的背景信號。這一步可以消除溶劑、吸收池等因素對測量結(jié)果的影響，提高測量的準(zhǔn)確性。
樣品測量
取出空白溶液吸收池，將制備好的樣品溶液吸收池放入光路中。然后按照儀器的操作指令進(jìn)行測量，儀器會記錄樣品在不同波長下的吸光度或透過率數(shù)據(jù)。在測量過程中，要注意保持樣品池的位置準(zhǔn)確，避免光線散射等情況影響測量結(jié)果。
四、數(shù)據(jù)處理與記錄
數(shù)據(jù)處理
根據(jù)測量得到的數(shù)據(jù)，利用儀器自帶的軟件或者外部數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行分析。例如，在定量分析中，可以使用朗伯-比爾定律來計(jì)算樣品的濃度；在定性分析中，可以通過比較樣品的光譜特征與標(biāo)準(zhǔn)光譜來確定樣品的成分。
記錄結(jié)果
將測量得到的數(shù)據(jù)、處理后的結(jié)果以及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)條件（如樣品名稱、濃度、測量波長等）詳細(xì)記錄下來。這樣可以方便后續(xù)的數(shù)據(jù)查詢、分析和報告撰寫。同時，對于重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，最好進(jìn)行多次測量取平均值，以減少偶然誤差。
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